Actividad inhibitoria de compuestos reactivos contra motivos Zn-fingers sobre la infección con arenavirus

Los virus de la familia Arenaviridae incluyen patógenos humanos causantes deseveras fiebres hemorrágicas, como los virus Lassa (LASV)y Junín (JUNV). Laproteína Z de los arenavirus, posee un motivo RING finger altamente conservadoentre los distintos arenavirus, necesario para la interacción con prote...

Full description

Bibliographic Details
Author: García, Cybele Carina
Format: doctoral thesis
Status:Published version
Publication Date:2004
Country:Argentina
Institution:Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Repository:Biblioteca Digital (UBA-FCEN)
Language:Spanish
OAI Identifier:tesis:tesis_n3719_Garcia
Online Access:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3719_Garcia
Access Level:Open access
Keyword:ARENAVIRUS
VIRUS JUNIN
VIRUS TACARIBE
VIRUS DE LA CORIOMENINGITIS LINFOCITARIA
ACTIVIDAD ANTIVIRAL
ACTIVIDAD VIRUCIDA
INHIBIDORES ZN-FINGER
COMPUESTOS AZOICOS
COMPUESTOS DISULFUROS
JUNIN VIRUS
TACARIBE VIRUS
LYMPHOCYTIC CHORIOMENINGITIS VIRUS
ANTIVIRAL ACTIVITY
ZN-FINGER INHIBITORS
AZOIC COMPOUNDS
DISULFIDES COMPOUNDS
Description
Summary:Los virus de la familia Arenaviridae incluyen patógenos humanos causantes deseveras fiebres hemorrágicas, como los virus Lassa (LASV)y Junín (JUNV). Laproteína Z de los arenavirus, posee un motivo RING finger altamente conservadoentre los distintos arenavirus, necesario para la interacción con proteínas celularesy virales, y por lo tanto es un punto de ataque ideal para la quimioterapia antiviralcontra las fiebres hemorrágicas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar laactividad inhibitoria de compuestos electrofílicos reactivos con motivos Zn fingers.provistos por el National Cancer Institute (USA), comprobar que Z es el blanco deacción de dichos compuestos y demostrar que su rol es esencial en el ciclo demultiplicación viral. Los compuestos, que incluyeron disulfuros alifáticos yaromáticos, derivados azoicos e hidrazidas fueron inicialmente evaluados por sucapacidad inhibitoria sobre la infección de células Vero contra los arenavirus JUNVy Tacaribe (TCRV). De un total de 15 compuestos ensayados, 2 presentaronsimilar eficacia en sus propiedades antivirales y virucidas, 6 presentaron unaactividad virucida superior a su efecto antiviral, 3 fueron estrictamente antivirales, 1 ejerció únicamente acción inactivante y 2 fueron inactivos. Los compuestosinactivantes mostraron ser efectivos también contra el virus de la coriomeningitislinfocitaria (LCMV), arenavirus prototipo de la familia. El análisis de los parámetros (tiempo y temperatura) que afectan la inactivación de JUNV y TCRV, demostróque la cinética de inactivación es rápida y que la reacción es dependiente de latemperatura, ya que no hubo inactivación del virus a 4°C. La interacción entre elvirus y el compuesto inactivante lleva a un bloqueo del ciclo de multiplicación virala nivel de la transcripción y replicación, ya que el mismo se adsorbe y penetra enlas células con igual eficacia que el virus control, pero no se detecta RNAcorrespondiente a los genes N, GPC y Z, en los viriones inactivados. Este hechose verificó por la ausencia total de síntesis de proteínas virales cuando se infectancélulas con virus inactivado. Sin embargo, los viriones inactivados mantienen lafuncionalidad de las proteínas externas, ya que se observaron títulos comparablesde anticuerpos neutralizantes en animales inoculados con viriones inactivados conrespecto a los inoculados con JUNV y TCRV infecciosos, indicando así lapreservación de la capacidad antigénica de las glicoproteínas luego deltratamiento inactivante. La acción diferencial de estos agentes sobre HSV-1 y losarenavirus confirma que la proteína Z de los arenavirus juega no sólo un rolregulatorio durante el ciclo viral, sino que tiene también importancia estructural, yaque los compuestos ejercen su acción tanto en la célula infectada, comodirectamente sobre el virión.Los resultados del estudio del efecto inhibitorio sobrela proteína Z purificada de LCMV y LASV, indicarían que los compuestos estándirigidos particularmente hacia la proteína Z de los arenavirus, interaccionandocon ella y provocando su multimerización, con la consiguiente pérdida defuncionalidad y capacidad infectiva del virión. Por otro lado, se sabe que lainfección con LCMV conduce a la recolalización de cuerpos nucleares de laproteína celular con homeodominios ricos en prolina (PRH) al citoplasma de lacélula infectada. En células infectadas con LCMV se observó que el tratamientocon NSC20625 inhibe la replicación del RNA viral, sin afectar la transcripción delgen celular prh. Además, el tratamiento con NSC20625, no sólo inhibió laexpresión de la proteína viral Z en las células infectadas con LCMV, sino queademás revirtió el patrón de distribución de la proteína PRH al patrón de PRHobservado en células normales. Por último, el compuesto azoico ANNB mostró unamplio rango de acción contra los arenavirus, ya que fue también inhibidor de lamultiplicación de otras cepas de JUNV, asi como de TCRV, Pichinde y LCMV. Elestudio del modo de acción antiviral manifestó que el ANNB afecta las etapastardías del ciclo de multiplicación viral; esto se comprobó al observar que ni lasetapas tempranas de adsorción e internalización viral, ni la síntesis y expresión deproteínas virales estaban afectadas. La producción de virus asociado a célulasestá igualmente afectada que el virus extracelular, por lo que el ANNB estaríabloqueando el correcto ensamblado dentro de la célula. Estos resultados demuestran por primera vez que una proteína esencial para losarenavirus es el blanco de acción de compuestos que representan agentesantivirales promisorios contra estos patógenos, mostrando similar eficacia in vitroque la ribavirina, la única droga conocida que ha sido ensayada en los pacientesinfectados con arenavirus.

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