Caracterización de receptores PYL involucrados en la ruta de señalización del Ácido Abscísico (ABA) en Cannabis sativa
[ES] La ruta de percepción y respuesta a ácido abscísico (ABA) es el principal sistema de regulación de la respuesta a estrés abiótico en plantas. Esta ruta está bien estudiada en distintas plantas modelo y en general parece mantener cierto grado de conservación. Debido a la dificultad de su estudio...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Fecha de publicación: | 2024 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Politècnica de València (UPV) |
| Repositorio: | RiuNet. Repositorio Institucional de la Universitat Politécnica de Valéncia |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:riunet.upv.es:10251/213667 |
| Acceso en línea: | https://riunet.upv.es/handle/10251/213667 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Ácido Abscísico (ABA) Cannabis sativa Metaboloma Receptores Metabolome Receptors PYR/PYL/RCARs Arabidposis thaliana BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Máster Universitario en Biotecnología Molecular y Celular de Plantas-Màster Universitari en Biotecnologia Molecular i Cel·lular de Plantes |
| Sumario: | [ES] La ruta de percepción y respuesta a ácido abscísico (ABA) es el principal sistema de regulación de la respuesta a estrés abiótico en plantas. Esta ruta está bien estudiada en distintas plantas modelo y en general parece mantener cierto grado de conservación. Debido a la dificultad de su estudio, o puede que a la estricta legislación entorno a Cannabis sativa, la ruta de ABA no ha sido especialmente estudiada en esta planta. Por ello, y basándonos en el patrón de conservación que esta ruta presenta entre distintas especies, nuestro planteamiento ha sido analizar el grado de conservación de los componentes de la ruta de ABA en C. sativa y comprobar la funcionalidad de los mismos. Para ello, durante el desarrollo del trabajo se realizaron diferentes aproximaciones experimentales para caracterizar y estudiar los genes que codifican para potenciales receptores de la hormona ácido abscísico (ABA) en la planta C. sativa. Se ha elegido este modelo ya que se trata de una planta con aplicaciones no sólo en la industria farmacológica (propiedades terapéuticas de cannabinoides), sino también en la industria textil (elaboración de prendas de cáñamo) y alimentaria (extracción de nutrientes de sus semillas) y la respuesta a sequía puede brindar conocimiento relevante para el cultivo. El conocimiento de la ruta de regulación a ABA puede permitirnos mejorar su productividad; con este fin, se estudió el grado de conservación de estos receptores y las variaciones en expresión de sus genes. Se midió la actividad de algunas de las proteínas de esta ruta, cuyos genes fueron aislados y clonados en vectores de expresión en bacterias. A su vez, se estudió el grado de sensibilidad a ABA y análogos de este. Para tal fin, se utilizaron métodos y técnicas bioinformáticas, de biología molecular y bioquímica, mediante aproximaciones in vivo e in vitro. Se utilizaron genes de la planta modelo Arabidopsis thaliana para la búsqueda de homólogos en los genomas secuenciados de C. sativa. Análisis de secuencia y filogenia permitió identificar miembros de las familias PP2C, PYL y SnRK, conservados con respecto a otras especies vegetales. Se estudiaron los niveles de expresión de los distintos componentes de la ruta de recepción y señalización a ABA en bases de datos públicos de expresión (obtenidos desde la base de datos SRA y reanalizados en el grupo de investigación). Estas expresiones se contrastaron con los perfiles de expresión en respuesta a ABA, obtenidos mediante qPCR desde callos somáticos de C. sativa, también generados en este trabajo. Por último, estos genes se clonaron en vectores que se transformaron en bacterias competentes E. coli diseñadas para la síntesis de proteínas recombinantes, donde luego se purificaron los receptores. Se optimizó y aplicó un protocolo de purificación de dichas proteínas, y finalmente se sometió a distintas pruebas para medir su actividad, compatibilidad con otros componentes de la ruta ABA en A. thaliana, sensibilidad a ABA y análogos de este diseñados en A. thaliana. |
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