Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases

El disseny i la producció de zimògens de ribonucleases que puguin ser específicament activats per la proteasa d’un patogen, constitueix un enginyós mecanisme per controlar la seva activitat enzimàtica i, conseqüentment, la seva citotoxicitat. En aquest treball es descriu la construcció de 12 variant...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Callís i Figueres, Mariona
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2015
País:España
Institución:CBUC, CESCA
Repositorio:TDR. Tesis Doctorales en Red
OAI Identifier:oai:www.tdx.cat:10803/293044
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/10803/293044
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Ribonucleases
Ribonucleasas
Zimògens
Zymogens
Citotoxicitat
Cytotoxicity
SIDA
HIV/AIDS
HIV protease
575
576
id ES_42e03361f2c972c145ff2c94024ffe3e
oai_identifier_str oai:www.tdx.cat:10803/293044
network_acronym_str ES
network_name_str España
repository_id_str
spelling Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleasesCallís i Figueres, MarionaRibonucleasesRibonucleasasZimògensZymogensCitotoxicitatCytotoxicitySIDAHIV/AIDSHIV protease575576El disseny i la producció de zimògens de ribonucleases que puguin ser específicament activats per la proteasa d’un patogen, constitueix un enginyós mecanisme per controlar la seva activitat enzimàtica i, conseqüentment, la seva citotoxicitat. En aquest treball es descriu la construcció de 12 variants de zimògens d’Onconasa® (ONC) i de ribonucleasa pancreàtica humana (HP-RNasa), activables per la proteasa del Virus de la Immunodeficiència Humana (HIV-1 PR). Els zimògens d’ONC i HP-RNasa s’activen in vitro amb la proteasa, mantenint una elevada estabilitat sobretot els zimògens d’ONC. L’augment d’activitat ribonucleolítica de la forma activada respecte el precursor, que resulta baix per les variants d’ONC, és d’unes 150 vegades per les d’HP-RNasa. Els zimògens d’ONC presenten una molt bona internalització en limfòcits-T humans, a més de no presentar, en cap dels casos, citotoxicitat en cèl·lules Jurkat en cultiu abans de l’activació. Finalment, s’ha estudiat l’estructura i dinàmica de la forma intacta d’un dels zimògens d’ONC per Ressonància Magnètica Nuclear (NMR), permetent el desenvolupament i optimització futura de nous zimògens més efectius com a agents antivirals.Design and production of ribonuclease zymogens that could be specifically activated by proteases of pathogens, would provide an ingenious mechanism to control their activity and, consequently, their cytotoxicity. Here we report the construction of 12 variants of Onconase® (ONC) and Human Pancreatic Ribonuclease (HP-RNase) zymogens that are recognized and activated specifically by the Human Immunodeficiency Virus Protease (HIV-1 PR). ONC- and HP-RNase- zymogens are activated by the HIV-1 PR in vitro, and mantain a high conformational stability mainly in ONC variants. The increase of catalytic efficiency of the activated form compared to the precursor has been low in ONC zymogens, but 150-fold for those of HP-RNase. ONC zymogens can internalize in human T-lymphocyte Jurkat cells efficiently, and all of them do not show any cytotoxicity in this type of cells before their activation. Finally, the structure and dynamics of intact form of one of ONC zymogens has been determined by Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (NMR). This represents a first step toward the development and optimization of more effective zymogens, as antiviral agents.Universitat de GironaRibó i Panosa, MarcVilanova i Brugués, MariaUniversitat de Girona. Departament de Biologia201520152015info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion190 p.application/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10803/293044TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)reponame:TDR. Tesis Doctorales en Redinstname:CBUC, CESCACatalánADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.info:eu-repo/semantics/openAccessoai:www.tdx.cat:10803/2930442026-06-14T12:46:07Z
dc.title.none.fl_str_mv Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
title Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
spellingShingle Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
Callís i Figueres, Mariona
Ribonucleases
Ribonucleasas
Zimògens
Zymogens
Citotoxicitat
Cytotoxicity
SIDA
HIV/AIDS
HIV protease
575
576
title_short Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
title_full Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
title_fullStr Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
title_full_unstemmed Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
title_sort Disseny, construcció i caracterització de zimògens de ribonucleases
dc.creator.none.fl_str_mv Callís i Figueres, Mariona
author Callís i Figueres, Mariona
author_facet Callís i Figueres, Mariona
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Ribó i Panosa, Marc
Vilanova i Brugués, Maria
Universitat de Girona. Departament de Biologia
dc.subject.none.fl_str_mv Ribonucleases
Ribonucleasas
Zimògens
Zymogens
Citotoxicitat
Cytotoxicity
SIDA
HIV/AIDS
HIV protease
575
576
topic Ribonucleases
Ribonucleasas
Zimògens
Zymogens
Citotoxicitat
Cytotoxicity
SIDA
HIV/AIDS
HIV protease
575
576
description El disseny i la producció de zimògens de ribonucleases que puguin ser específicament activats per la proteasa d’un patogen, constitueix un enginyós mecanisme per controlar la seva activitat enzimàtica i, conseqüentment, la seva citotoxicitat. En aquest treball es descriu la construcció de 12 variants de zimògens d’Onconasa® (ONC) i de ribonucleasa pancreàtica humana (HP-RNasa), activables per la proteasa del Virus de la Immunodeficiència Humana (HIV-1 PR). Els zimògens d’ONC i HP-RNasa s’activen in vitro amb la proteasa, mantenint una elevada estabilitat sobretot els zimògens d’ONC. L’augment d’activitat ribonucleolítica de la forma activada respecte el precursor, que resulta baix per les variants d’ONC, és d’unes 150 vegades per les d’HP-RNasa. Els zimògens d’ONC presenten una molt bona internalització en limfòcits-T humans, a més de no presentar, en cap dels casos, citotoxicitat en cèl·lules Jurkat en cultiu abans de l’activació. Finalment, s’ha estudiat l’estructura i dinàmica de la forma intacta d’un dels zimògens d’ONC per Ressonància Magnètica Nuclear (NMR), permetent el desenvolupament i optimització futura de nous zimògens més efectius com a agents antivirals.
publishDate 2015
dc.date.none.fl_str_mv 2015
2015
2015
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10803/293044
url http://hdl.handle.net/10803/293044
dc.language.none.fl_str_mv Catalán
language_invalid_str_mv Catalán
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 190 p.
application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universitat de Girona
publisher.none.fl_str_mv Universitat de Girona
dc.source.none.fl_str_mv TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)
reponame:TDR. Tesis Doctorales en Red
instname:CBUC, CESCA
instname_str CBUC, CESCA
reponame_str TDR. Tesis Doctorales en Red
collection TDR. Tesis Doctorales en Red
repository.name.fl_str_mv
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1869406977311899648
score 15,228081

Similares en LA Referencia