Estudio del efecto de quitinasas recombinantes como potenciadoras de la actividad insecticida de un aislamiento de Beauveria bassiana para el control de Diatraea saccharalis
Las quitinasas son enzimas hidrolíticas provenientes de diferentes fuentes biológicas. En virus y hongos entomopatógenos, las quitinasas han sido reportadas como importantes factores de virulencia que cortan la estructura de la quitina presente en las dos principales barreras de protección de los in...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión aceptada para publicación |
| Fecha de publicación: | 2020 |
| País: | Colombia |
| Recursos: | Universidad Nacional de Colombia |
| Repositorio: | Repositorio UN |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.unal.edu.co:unal/77800 |
| Acesso em linha: | https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/77800 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | 500 - Ciencias naturales y matemáticas Beauveria bassiana Chitinase Virulence Diatraea saccharalis Recombinant protein Proteína recombinante Quitinasa Virulencia |
| Resumo: | Las quitinasas son enzimas hidrolíticas provenientes de diferentes fuentes biológicas. En virus y hongos entomopatógenos, las quitinasas han sido reportadas como importantes factores de virulencia que cortan la estructura de la quitina presente en las dos principales barreras de protección de los insectos: la cutícula y la matriz peritrófica del intestino medio. Con el fin de estudiar el efecto de quitinasas recombinantes en la actividad insecticida de Beauveria bassiana sobre larvas de Diatraea saccharalis, en este trabajo se clonaron y expresaron en E. coli los marcos abiertos de lectura que codifican para las quitinasas Chit37 y Chit2A provenientes de los aislamientos colombianos Bv062 de B. bassiana y VG008 del granulovirus de Spodoptera frugiperda, respectivamente. La quitinasa fúngica recombinante (rChit37) purificada a partir de la fracción soluble del cultivo de células BL21-DE3, presentó actividad quitinolítica dual de tipo quitobiosidasa y endoquitinasa (EC 3.2.2.14) bajo condiciones óptimas de 45°C y pH 5.0. La rChit37 purificada potenció la actividad insecticida de B. bassiana sobre larvas de segundo instar de D. saccharalis; cuando se adicionó a una concentración de 300 µg/mL en una suspensión de 1x106 conidios/mL, se evidenció una reducción de 46% y 68% en los tiempos letales (TL50 y TL90) y un incremento de la eficacia en 61%. La proteína viral recombinante (rChit2A) presentó un dominio de unión a quitina en su secuencia, sin embargo, no se observó dominio catalítico, lo que se corroboró con la ausencia de actividad enzimática. Los hallazgos de este trabajo proveen una prueba concepto inicial para el estudio de quitinasas recombinantes en el desarrollo de futuras estrategias de potenciación de hongos entomopatógenos con potencial en el control biológico. |
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