Estudo da composição química e atividade anti-inflamatória da fração diclorometânica e subfrações de partes aéreas de Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltd. Micheli)

Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli, popularly known as chapéu de couro in Brazil, is a plant species traditionally used to treat inflammatory diseases such as arthritis and gout. The main goal of this study was to evaluate in vitro the effect of E. grandiflorus dichloromethane f...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Marina Leão Souza Leite
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2018
País:Brasil
Institución:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
Repositorio:Repositório Institucional da UFMG
Idioma:portugués
OAI Identifier:oai:repositorio.ufmg.br:1843/33801
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/1843/33801
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Echinodorus grandiflorus
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description Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli, popularly known as chapéu de couro in Brazil, is a plant species traditionally used to treat inflammatory diseases such as arthritis and gout. The main goal of this study was to evaluate in vitro the effect of E. grandiflorus dichloromethane fraction and subfractions on the production of inflammatory mediators, as well as to investigate the chemical composition of the active fraction. The crude extract of E. grandiflorus aerial parts was dissolved in water (40 mg/mL) and partitioned with dichloromethane. This fraction was filtered over active charcoal / celite (2:1) by eluting with methanol, acetone, dichloromethane and nhexane. The methanol and acetone sub-fractions are further fractionated by silica gel column chromatography eluted with dichloromethane / ethyl acetate / methanol in different proportions. The effect of the fractions were evaluated in vitro on LPSstimulated THP-1 cells. And the dexamethasone (0,1 µM/per well) was employed as positive control. Among the assayed fractions, dichloromethane fraction reduced more significantly the release of both mediators by LPS-stimulated THP-1 cells and showed no cytotoxicity at all tested concentrations (10, 30, and 90 µg/mL). Fractionation of methanolic sub-fraction by silica gel column chromatography afforded the sub-fraction 63-66, which tested at 10 µg/mL and 30 µg/mL elicited similar inhibition of TNF-α; and IL-1β release. The chemical composition of sub-fraction 63-66 was investigated by spectroscopy analyses (IR, GC-MS, UPLC-MS-MS and NMR) and allowed the identification of palmitic acid (C16H32O2) as its main constituent. Our findings point out Echinodorus grandiflorus as a source of bioactive compounds potentially useful to treat inflammatory diseases.
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The methanol and acetone sub-fractions are further fractionated by silica gel column chromatography eluted with dichloromethane / ethyl acetate / methanol in different proportions. The effect of the fractions were evaluated in vitro on LPSstimulated THP-1 cells. And the dexamethasone (0,1 µM/per well) was employed as positive control. Among the assayed fractions, dichloromethane fraction reduced more significantly the release of both mediators by LPS-stimulated THP-1 cells and showed no cytotoxicity at all tested concentrations (10, 30, and 90 µg/mL). Fractionation of methanolic sub-fraction by silica gel column chromatography afforded the sub-fraction 63-66, which tested at 10 µg/mL and 30 µg/mL elicited similar inhibition of TNF-α; and IL-1β release. The chemical composition of sub-fraction 63-66 was investigated by spectroscopy analyses (IR, GC-MS, UPLC-MS-MS and NMR) and allowed the identification of palmitic acid (C16H32O2) as its main constituent. Our findings point out Echinodorus grandiflorus as a source of bioactive compounds potentially useful to treat inflammatory diseases.Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl. Micheli, é uma planta popularmente conhecida como chapéu de couro. No Brasil, apresenta uso tradicional principalmente em doenças inflamatórias como artrite e gota. O principal objetivo do presente trabalho foi avaliar in vitro a inibição de mediadores pro- inflamatórios da fração diclorometânica e subfrações de E. grandiflorus, bem como investigar a composição química das frações ativas. O extrato etanólico das partes aéreas de E. grandiflorus foi dissolvido em água (40 mg/mL) e subsequentemente submetido a partição com solventes imiscíveis (n-hexano, diclorometano e acetato de etila). A fração diclorometânica (DCM) foi submetida à filtração utilizando-se como elemento filtrante a mistura de carvão ativado / celite (2:1), eluída sequencialmente com os seguintes solventes: metanol, acetona, diclorometano e n-hexano. As sub-frações metanólicas e acetônicas foram submetidas a subsequente purificação utilizando coluna empacotada com sílica gel e eluída sequencialmente com diclorometano, acetato de etila e metanol em diferentes proporções. A atividade das frações sobre a liberação de citocinas pró-inflamatórios (TNF-α e IL-1β) foram avaliadas in vitro em células THP-1 estimuladas por LPS. Empregando a dexametasona como controle positivo na concentração (0,1 µM por poço). Dentre as frações avaliadas, a fração diclorometânica foi a mais ativa reduzindo de forma significativa a liberação de ambos mediadores inflamatórios em células THP-1 estimuladas com LPS e não demonstrou citotoxicidade em nenhuma das concentrações avaliadas (10, 30, e 90 µg/mL). O fracionamento da sub-fração metanólica 1B em coluna cromatográfica empacotada com sílica gel levou a obtenção da sub-fração 63-66, que foi testada nas concentrações de 10 µg/mL e 30 µg/mL, e promoveu inibição significativa de TNF-α e IL-1β. A composição química da sub-fração supracitada foi investigada por métodos espectroscópicos usuais (IV, CG-MS, CLUE-MS-MS e RMN) e levou a identificação inequívoca do ácido palmítico (C16H32O2) como seu constituinte principal. Nossos resultados demonstram que Echinodorus grandiflorus é uma fonte de compostos bioativos com uso potencial no tratamento de doenças inflamatórias.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorUniversidade Federal de Minas GeraisBrasilFARMACIA - FACULDADE DE FARMACIAPrograma de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasUFMGRodrigo Maia de Páduahttp://lattes.cnpq.br/3129875518945632Fernão Castro Braga2020-07-16T01:15:00Z2020-07-16T01:15:00Z2018-07-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1843/33801porhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGMarina Leão Souza Leite2020-07-16T01:15:00Zoai:repositorio.ufmg.br:1843/33801Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oairepositorio@ufmg.bropendoar:2020-07-16T01:15Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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