Caracterização molecular e análise da expressão gênica da LaNTPDase-1 em Leishmania amazonensis
O presente trabalho trata de um estudo sobre as enzimas nucleotideo trifosfato difosfohidrolase de Leishmania (Leishmania) amazonensis (nucleoside triphosphate diphosphohydrolase - LaNTPDase), um dos principais agentes etiológicos da leishmaniose difusa no Brasil. O desenho experimental do estudo co...
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| Tipo de documento: | dissertação |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2017 |
| País: | Brasil |
| Recursos: | Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) |
| Repositório: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
| Idioma: | português |
| OAI Identifier: | oai:arca.fiocruz.br:icict/39506 |
| Acesso em linha: | https://arca.fiocruz.br/handle/icict/39506 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | LaNTPDase-1 Leishmania amazonensis Leishmaniose NTPDase Nucleoside triphosphate diphosphohydrolase Leishmania Nucleosídeo-trifosfatase |
| Resumo: | O presente trabalho trata de um estudo sobre as enzimas nucleotideo trifosfato difosfohidrolase de Leishmania (Leishmania) amazonensis (nucleoside triphosphate diphosphohydrolase - LaNTPDase), um dos principais agentes etiológicos da leishmaniose difusa no Brasil. O desenho experimental do estudo contempla uma abordagem estrutural in silico e uma abordagem experimental de expressão genica do gene codificante desta enzima nos promastigotas e amastigotas do parasito. No estudo foi elucidada a sequência nucleotídica codificante correspondente à NTPDase de L. amazonensis. A sequência obtida foi alinhada com NTPDases de outras espécies do gênero Leishmania. Com os ensaios foi possível propor que esta enzima pode estar ligada à membrana plasmática por um domínio transmembranar, sendo denominada NTPDase-1. A estrutura terciária da enzima foi proposta por modelagem por homologia, indicando importantes diferenças estruturais, especialmente na região de ligação aos nucleotídeos. Expressão heteróloga da enzima de L. amazonensis (rLaNTPDase-1) foi realizada indicando uma proteína de 45 kDa em condições desnaturantes Em paralelo, avaliamos a modulação da expressão gênica da LaNTPDase-1 entre dois isolados de L. amazonensis (IFLA/BR/1967/PH8 e MHOM/BR/77/LTB0016), com distintos percentuais de infectividade em macrófagos de camundongos BALB/c cepa PH8 (31,0%±6,3) e cepa LTB0016 (18,2%± 5,3) e perfis diferentes das fases logarítmica e estacionarias de crescimento in vitro dos promastigotas. Observamos que durante a curva de crescimento, somente a cepa PH8 apresentou um aumento na expressão do gene no quarto dia de cultivo (4,3±2), quando comparado com a LTB0016. A expressão da LaNTPDase-1 mostrou-se aumentada nos amastigotas, quando comparada com os promastigotas da cepa PH8 (>5,2±0,8) e da cepa LTB0016 (>0,8±0,5). Os resultados aqui apresentados indicam que o parasito L. amazonensis expressa o gene correspondente a enzima NTPDase-1, sendo que este gene é mais ix expresso nos amastigotas do que nos promastigotas. Estes resultados reforçam a importância desta enzima na fase do parasito quando no hospedeiro vertebrado. |
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