Estudo de ves??culas extracelulares produzidas por cardiomi??citos humanos, derivados de c??lulas-tronco pluripotentes, em homeostase e estresse celular
Centenas de milhares de pessoas morrem por ano no Brasil e no mundo devido a problemas card??acos. Diversas s??o as poss??veis causas de desenvolvimento destas patologias, sendo elas: devido a h??bitos n??o saud??veis de alimenta????o, a exposi????o a outros agentes considerados t??xicos a sa??de ca...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2019 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade Católica de Brasília (UCB) |
| Repositorio: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UCB |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:bdtd.ucb.br:tede/2557 |
| Acceso en línea: | https://bdtd.ucb.br:8443/jspui/handle/tede/2557 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Doxorrubicina C??lulas-tronco Cardiomi??citos Toxicologia in vitro Ves??culas extracelulares Doen??as cardiovasculares Cardiovascular disease Extracellular vesicles In vitro toxicology Cardiomyocyte Doxorubicin Stem cell CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA |
| Sumario: | Centenas de milhares de pessoas morrem por ano no Brasil e no mundo devido a problemas card??acos. Diversas s??o as poss??veis causas de desenvolvimento destas patologias, sendo elas: devido a h??bitos n??o saud??veis de alimenta????o, a exposi????o a outros agentes considerados t??xicos a sa??de card??aca dentre outros. Alguns desses agentes t??xicos podem ser medicamentos com efeito colateral como antineoplasicos. A doxorrubicina ?? um f??rmaco amplamente utilizado no tratamento de diversas neoplasias, no entanto, possui efeito colateral cardiovascular elevado, causando hipertrofia. As c??lulas card??acas podem ser obtidas a partir de c??lulas-tronco (iPSCs) que s??o uma importante fonte de obten????o de c??lulas tecido especificas. O presente trabalho focou na obten????o de cardiomi??citos derivados de iPSCs para estudar as ves??culas extracelulares (VE???s) em homeostase e estresse por Doxorrubicina (DOXO). A diferencia????o de cardiomi??citos foi bem sucedida e a caracteriza????o das c??lulas revelou express??o de marcadores espec??ficos como MIXL1, GATA4, hTNNT e imunofluoresc??ncia positiva para troponina card??aca, al??m da contra????o celular espont??nea. O ensaio de MTT realizado com as concentra????es de 0,1 ??M e 0,5 ??M de DOXO revelou que a concentra????o de 0,1 ??M foi a ideal para os ensaios seguintes. A avalia????o de RT-PCR demonstrou redu????o da express??o dos genes BCL2, TG??1 e p53 nos cardiomi??citos tratados com DOXO e aumento da express??o de FGF2, condizente com o perfil hipertr??fico e patol??gico induzido pela DOXO. O isolamento das ves??culas extracelulares produzidas por cardiomi??citos pelos diferentes m??todos n??o apresentou grande diferen??a pela quantifica????o por ensaio de Bradford. A RT-PCR realizada nos transcritos da VE???s isolada apresentou perfil de express??o parcialmente semelhante ??s c??lulas. Onde os genes BCL2 e FGF2 apresentaram aumento da express??o das VE???s isoladas de cardiomi??citos estressados em compara????o com o controle e os genes TGF??1 e p53 tiveram o n??vel de express??o reduzido em VE???s de cardiomi??citos estressados. Sugerindo que pode haver uma sele????o de transcritos intencional para comunica????o celular. Al??m disso, os dados obtidos sugerem que o conte??do de mRNA das c??lulas e VE???s derivadas podem ser diversos e estudos adicionais sobre o contexto de estresse da DOXO, podem ampliar o entendimento da fisiopatologia desta intoxica????o. |
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