Avaliação "in vitro" da adição fracionada da dimetilformamida na criopreservação de sêmen equino

The aim of this research was to evaluate the efficacy of the manner of the cryoprotectantaddition, one or multiple steps, and the cooling rate, on equine semen cryopreservation. Thelesion intensity of the spermatozoa, during the process of the cryopreservation, was also studied.One ejaculate of nine...

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Detalhes bibliográficos
Autor: Fernanda Guimaraes Cardoso de Mello
Formato: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2005
País:Brasil
Recursos:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
Repositorio:Repositório Institucional da UFMG
Idioma:portugués
OAI Identifier:oai:repositorio.ufmg.br:1843/LGPD-6NCFU9
Acesso em linha:http://hdl.handle.net/1843/LGPD-6NCFU9
Access Level:acceso abierto
Palavra-chave:semen
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Alan Maia Borges
Elmo Gomes Diniz
Paola Pereira das Neves Snoeck
Jose Domingos Guimaraes
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description The aim of this research was to evaluate the efficacy of the manner of the cryoprotectantaddition, one or multiple steps, and the cooling rate, on equine semen cryopreservation. Thelesion intensity of the spermatozoa, during the process of the cryopreservation, was also studied.One ejaculate of nine stallions was used to test the modified INRA 82 with 5% of dimetylformamide with the following treatments: addition of the dimethyl formamide in one step andfast cooling rate (T1- control), addition of the dimethyl formamide in multiple steps and fastcooling rate (T2), addition of the dimethyl formamide in one step and slow cooling rate (T3),addition of the dimethyl formamide in multiple steps and slow cooling rate (T4). Aftercentrifugation of ejaculates in INRA 82 extender, sperm pellets were diluted with finalextenders to reach the concentration of 100X106 sperm cells per ml. Semen was frozen threecentimeters above the nitrogen level, during ten minutes, in 0.5 ml straws. Thawing of sampleswas done at 52°C for ten seconds followed by immersion of the straw in a water bath at 37°Cfor thirty seconds. Immediately pos dimethyl formamide addition, total and progressive motilityand sperm vigor were evaluated under light microscope (400X). The functional spermmembrane integrity was evaluated by the hypoosmotic swelling test. No differences betweentreatments were observed, before the cooling of the straw. Immediately post thaw, total andprogressive motility and sperm vigor were evaluated under light microscope (400X). Functionaland structural sperm membrane integrity were evaluated by the hypoosmotic swelling test andfluorescent dyes, carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide, respectively. Thespermatozoa was also evaluated in the temperature resistance test. The multiple steps addition ofthe cryoprotectants was better than the one step addition in all parameters valued, independentlyfrom the cooling rate. The slow cooling rate was better than the fast cooling rate in allparameters valued, independently from the manner of the dimethyl formamide addition. It maybe concluded that the association of the multiple steps addition of the dimethyl formamide withthe slow cooling rate is the best protocol to freeze the equine semen and that the lesions causedby osmotic and cold stress may occur during the cooling and freezing process
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Aftercentrifugation of ejaculates in INRA 82 extender, sperm pellets were diluted with finalextenders to reach the concentration of 100X106 sperm cells per ml. Semen was frozen threecentimeters above the nitrogen level, during ten minutes, in 0.5 ml straws. Thawing of sampleswas done at 52°C for ten seconds followed by immersion of the straw in a water bath at 37°Cfor thirty seconds. Immediately pos dimethyl formamide addition, total and progressive motilityand sperm vigor were evaluated under light microscope (400X). The functional spermmembrane integrity was evaluated by the hypoosmotic swelling test. No differences betweentreatments were observed, before the cooling of the straw. Immediately post thaw, total andprogressive motility and sperm vigor were evaluated under light microscope (400X). Functionaland structural sperm membrane integrity were evaluated by the hypoosmotic swelling test andfluorescent dyes, carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide, respectively. Thespermatozoa was also evaluated in the temperature resistance test. The multiple steps addition ofthe cryoprotectants was better than the one step addition in all parameters valued, independentlyfrom the cooling rate. The slow cooling rate was better than the fast cooling rate in allparameters valued, independently from the manner of the dimethyl formamide addition. It maybe concluded that the association of the multiple steps addition of the dimethyl formamide withthe slow cooling rate is the best protocol to freeze the equine semen and that the lesions causedby osmotic and cold stress may occur during the cooling and freezing processEste trabalho teve como objetivos avaliar a eficiência de duas formas de adição da dimetilformamida a 5%, utilizando-se como meio diluidor base o INRA 82 modificado, e de duas curvas de congelamento na preservação espermática eqüina, avaliada in vitro. Objetivou-setambém verificar o grau de lesão dos espermatozóides durante as diversas etapas do processo de criopreservação. Um ejaculado de nove garanhões foi utilizado para testar quatro tratamentos: adição do crioprotetor, em única etapa, sem resfriamento prévio (T1- controle); adição do crioprotetor, em múltiplas etapas, sem resfriamento prévio (T2); adição do crioprotetor, em única etapa, com resfriamento prévio (T3); e adição do crioprotetor, em múltiplas etapas, com resfriamento prévio (T4). O sêmen foi envasado em palhetas de 0,5 mL e congelado três centímetros acima da lâmina do nitrogênio líquido e posteriormente submerso no mesmo. O descongelamento foi realizado a 52°C por dez segundos, seguido da imersão em banho-maria a 37°C por mais trinta segundos. Após a adição do crioprotetor, em única ou múltiplas etapas,foram avaliados os parâmetros espermáticos de motilidade espermática total, progressiva e vigor do movimento espermático, em microscopia óptica (aumento de 400X). A integridade funcional da membrana plasmática foi avaliada por meio do teste hiposmótico. Após o descongelamento, foram avaliados os parâmetros de motilidade espermática total, motilidade espermática progressiva, vigor do movimento espermático e integridade estrutural das membranasespermáticas por meio de sondas fluorescentes (carboxifluoresceína e iodeto de propídeo). Os espermatozóides foram submetidos ao teste de termo-resistência. Imediatamente após a adição do crioprotetor, em única ou múltiplas etapas, não foram observadas diferenças entre ostratamentos (p>0,05). Após o descongelamento, foi observada superioridade da adição do crioprotetor, em múltiplas etapas, em todos os parâmetros avaliados, independentemente da curva de congelamento adotada, com ou sem resfriamento controlado prévio (p<0,05). A curva de congelamento, com resfriamento controlado prévio na velocidade de -0,25ºC/minuto, foi mais eficaz na preservação da viabilidade espermática pós-descongelamento, em todos os parâmetros avaliados, independentemente da forma de adição do crioprotetor, em única ou múltiplas etapas (p<0,05). Os resultados obtidos permitem concluir que a adição do crioprotetor, em múltiplas etapas, associado a uma curva de resfriamento lenta, foi o protocolo mais eficaz na preservação da viabilidade espermática eqüina, avaliada in vitro, após o descongelamento e que as injúrias são ocasionadas pelo estresse osmótico e pelo método de resfriamento dos espermatozóidesUniversidade Federal de Minas GeraisUFMGMarc Roger Jean Marie HenryAlan Maia BorgesElmo Gomes DinizPaola Pereira das Neves SnoeckJose Domingos Guimaraes2019-08-10T01:06:45Z2019-08-10T01:06:45Z2005-05-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1843/LGPD-6NCFU9info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGFernanda Guimaraes Cardoso de Mello2019-11-14T09:24:50Zoai:repositorio.ufmg.br:1843/LGPD-6NCFU9Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oairepositorio@ufmg.bropendoar:2019-11-14T09:24:50Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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