Isolamento e caracterização imunológica de roptrias de Neospora caninum
Neospora caninum é um parasita que causa perdas consideráveis na pecuária bovina. Compreender os seus mecanismos de infecção é essencial para compreender o seu impacto nos rebanhos. O fracionamento celular e a caracterização das frações poderão contribuir para a seleção de proteínas e organelas com...
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| Format: | article |
| Status: | Published version |
| Publication Date: | 2024 |
| Country: | Brasil |
| Institution: | Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (FMVZ-USP) |
| Repository: | Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science |
| Language: | English |
| OAI Identifier: | oai:revistas.usp.br:article/219874 |
| Online Access: | https://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/219874 |
| Access Level: | Open access |
| Keyword: | Neospora caninum Neosporosis Organelles Rhoptries Fractionation Neosporose Organelas Roptrias Fracionamento |
| Summary: | Neospora caninum é um parasita que causa perdas consideráveis na pecuária bovina. Compreender os seus mecanismos de infecção é essencial para compreender o seu impacto nos rebanhos. O fracionamento celular e a caracterização das frações poderão contribuir para a seleção de proteínas e organelas com características imunogênicas. Assim, o presente estudo teve como objetivo isolar frações roptrias e subcelulares de N. caninum utilizando gradiente de sacarose e caracterizar sua imunogenicidade em camundongos. Taquizoítos da cepa Nc-1 foram cultivados em células VERO, fracionados por esferas de vidro e ultracentrifugados em gradiente de sacarose variando de 0,25 a 1,8 M. As frações foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Cada fração foi inoculada com adjuvante Quil-A (20 μg) em camundongos para produzir anticorpos policlonais para cultura de células de imunofluorescência e western blotting. A ultracentrifugação resultou em três frações distintas (F1, F2 e F3) e um pellet. A fração um (F1) na concentração de 1,0 M continha membranas do parasita, F2 a 1,4 M continha roptria e conoide, F3 a 1,6 M continha mitocôndrias e o sedimento na fração de 1,8 M continha restos celulares. As quatro frações exibiram as mesmas bandas com pesos moleculares de 50, 51, 52 e 62 kDa. Apenas F2 apresentou estruturas de roptria e uma proteína de 54 kDa semelhante a NcROP2. Este estudo separou com sucesso frações subcelulares de N. caninum através de processamento e ultracentrifugação, identificou estruturas de roptria e determinou pesos específicos de proteínas de cada fração. |
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